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人惡性黑色素瘤細胞A375
人惡性黑色素瘤細胞A375 株特性：
生長特性：貼壁生長
形態(tài)特征：上皮細胞
微生物及支原體檢測：陰性
安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。
注意事項：
1、觀察細胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。
2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。
4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們。
