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MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡的檢測(cè)原理是什么
更新時(shí)間:2018-03-26 點(diǎn)擊次數(shù):1870次
   MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡細(xì)胞壞死和凋亡是兩種截然不同的細(xì)胞學(xué)現(xiàn)象,二者發(fā)生的過(guò)程在形態(tài)學(xué)上有很大的區(qū)別。在細(xì)胞壞死時(shí),細(xì)胞膜發(fā)生滲漏,細(xì)胞內(nèi)容物包括細(xì)胞器及染色質(zhì)釋放到胞外。而在細(xì)胞凋亡過(guò)程,起始階段,染色質(zhì)固縮、分離并沿核膜分布,細(xì)胞質(zhì)亦發(fā)生固縮,但細(xì)胞膜依然完整未失去選擇透性;MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡在凋亡后期,核染色質(zhì)斷裂為大小不等的片斷,與某些細(xì)胞器如線粒體一起聚集,為反折的細(xì)胞膜包圍,后逐漸分離,形成凋亡小體。
  
  MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在540或720nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。
  
  MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖凋亡本身就是可以檢測(cè)細(xì)胞增殖的,你作細(xì)胞增殖方面的研究是要有陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照的,比如我們做脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)是用CONA作為陽(yáng)性對(duì)照,而陰性對(duì)照是只加細(xì)胞的培養(yǎng)孔,在鋪96孔板是加100ul細(xì)胞懸液,然后把檢測(cè)的藥物和CONA(分別是100ul,用培養(yǎng)基稀釋的)加進(jìn)去,陰性對(duì)照就是加10ul培養(yǎng)基即可,等到作用48小時(shí)加MTT,每孔20ul,等MTT作用4小時(shí),可以用SDS裂解過(guò)夜,然后用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值,增殖指數(shù)=樣品OD/陰性對(duì)照OD,如果大于1,說(shuō)明有促進(jìn)細(xì)胞增殖作用,我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)用這種方法篩選到幾種有免疫增強(qiáng)作用的糖類啦,現(xiàn)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都做啦,效果很不錯(cuò)。
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